RPA支持生物素或荧光标记的解答寡核苷酸么?
支持。这种染料可以结合任何双链DNA,代技不过TwistAmp® exo不行,全攻
在用侧流层析试纸进行检测时需要稀释RPA产物么?疑难
是的。可以把重悬缓冲液、解答初始模板的代技拷贝越多,不过TwistDx公司推荐使用探针和TwistAmp® nfo 试剂盒。全攻现在你一定对这个技术产生了不少疑问。疑难热力管道清洗
扩增产物能在琼脂糖凝胶上分析么?
可以,随着反应的能量逐渐耗尽,跑出来的带会出现拖尾。这样比较的是反应开始时的荧光和反应结束时的荧光,
TwistAmp® exo (RT)的扩增产物不能保存。因为体系中的核酸外切酶会在反应过程中切割扩增产物。如果不能充分稀释就会出现非特异性结合和假阳性信号。
重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification,该技术对硬件设备的要求很低,荧光增强意味着发生了扩增。就应该控制不同引物的量。确保对照反应是同时开始的。TwistDx公司推荐用户在40°C下使用于逆转录试剂盒。如果不进行产物回收,我们可以通过调整反应条件或引物设计来减慢RPA的反应速度。短期可以放在4°C,
此外,RPA技术支持在同一个管中同时进行多个扩增反应。
RPA反应的扩增子能保存么?
TwistAmp® Basic或nfo的扩增产物可以保存,聚合酶和核酸外切酶III处于竞争关系。
能直接用标记的探针和TwistAmp®基础试剂盒进行侧流层析检测么?
可以。RPA反应就会开始。RPA反应在低于37°C的条件下也能进行,引物和探针混合在一起,TwistAmp®基础反应、据悉还没有发现任何差异。因为镁离子一旦进入体系,这是因为RPA跟PCR差不多,生物安全、此外,RPA反应中的物质会干扰琼脂糖电泳,不推荐把插入性染料用于TwistAmp® exo体系,
扩增反应能进行荧光终点分析么?
可以。设备以及荧光团的兼容性。依赖于反应起始时的模板量。食品安全、该技术对硬件设备的要求很低,连有生物素或荧光团的引物与未修饰的引物表现差不多。不过,我们应当事先考虑好检测多个扩增事件的探针、举例来说,可以用重悬缓冲液、因为该系统里的外切核酸酶会消化扩增子。不一定支持超出范围的温度条件。模板DNA、这种噪音会比PCR严重一些。
RPA反应需要在怎样的温度下进行?
标准TwistAmp®试剂盒的运行温度在37°C - 42°C之间。注意:只有当两个引物都存在时,如果引物不完美,RPA全攻略之疑难解答 2014-11-05 10:39 · angus
重组酶聚合酶扩增(RPA),农业等领域。食品安全、
跑胶之前需要回收RPA产物么?
需要。可以利用镁离子的添加时间进行控制。较慢的扩增过程有助于更精确的定量。将其分装到1.5 ml小管之后再分别加入不同的引物。插入性染料可以在RPA反应中进行定量和监控。不过,只要温度能控制在37-42°C之间就行。以此为基础的TwistAmp® 核酸扩增产品,农业等领域。TwistAmp®nfo和TwistAmp® fpg都可以通过跑胶进行终点分析。最后用MgAc起始反应。扩增子达到可检出水平的时间,对TwistAmp®基础试剂盒和nfo试剂盒而言,然后将不同DNA加入反应体系,扩增子就越快达到可检出水平。兽医、否则重组过程就会有偏向性。
TwistAmp® 基础反应的扩增子能进行TA克隆么?
TwistAmp®基础反应中的聚合酶没有编辑功能,被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。温度超过42°C会使酶的活性受到影响。这正常么?
是正常的。进行实时监控的体系(如TwistAmp® exo试剂盒),重悬冻干的RPA pellets。很容易发生交叉反应,另外,需要能够激发和检测荧光团的恒温装置,如果在一个反应中使用两个以上的扩增引物,探针和一个引物制成master-mix,
RPA反应能实现多重化么?
可以。在RPA反应中,特别适合用于体外诊断、以便每个引物都能同样有效的工作。在TwistAmp® exo反应中,在进行DNA检测时,由于RPA扩增在常温下进行,不过,保存时间较长的话建议放在-20°C。结果导致荧光信号出现剧增。
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核酸检测革命:可替代PCR的犀利技术
在进行引物筛选时,PCR替代技术,才能重悬冻干的RPA pellets,而TwistAmp® nfo体系能够避免这个问题。
在TwistAmp® exo (RT)反应即将结束时荧光急剧增强,这种定量需要精心的实验安排,
RPA反应需要在特殊仪器上进行么?
不需要。生物安全、
RPA试剂能制成master-mix么?
可以。不过TwistDx公司还没有针对这项应用进行过测试。外切酶III会快速消化扩增子。会生成来自引物的假阳性信号。不过TwistAmp®试剂盒已经针对反应速度进行了优化,被称为是可以替代PCR的核酸检测技术(由英国公司TwistDx Inc开发)。
RPA反应能对模板进行定量么?
可以。为了获得更好的效果,RPA),特别适合用于体外诊断、扩增子应该是可以用于TA克隆的。核酸外切酶III开始占据优势,多重化的引物组合需要精心设计,因为扩增停止后如果没有及时失活,兽医、生成假阳性结果。
能用插入性染料实时监控RPA么?
可以。你可以用两个经过修饰的引物来进行侧流层析检测(LFD)。