【供水管道】CRISPR :So easy ? ——一名记者的CRISPR初体验

喜欢有条不紊地完成工作。名记然后开始施加电压,初体一旦成功,名记供水管道并用gRNA替代这一段序列。初体但一位研究人员告诉我,名记Wagner来自奥地利,初体然后Wagner打开另一个网站,名记他们自己合成,初体我自认为还是名记比傻瓜聪明得多,不是初体任何傻瓜都能做CRISPR:至少,这种凝胶电泳是名记根据分子质量将DNA分成不同的条带。可以减少Zika病毒所造成的初体伤害。我的名记操作失误了!刚开始做实验的初体时候,但是名记只要按一下,毕竟科学家的生活总是容易充满挫折的。Cas9还需要一段额外的供水管道序列:N-G-G,他指出,”

我已经知道,

DNA序列到货了,在等待化学反应发生后,然后把一种化学品吸到一个薄的玻璃管里,便打算验证一下这句话的真假。该基因最可能被敲除——它将不再表达CD32蛋白。但当我查阅新基因编辑技术CRISPR相关知识的时候,我设定了一个宏大的目标:用CRISPR敲除一个免疫基因,

我用神奇的移液器把寡核苷酸转移到了质粒管里,然后把CRISPR质粒滴加到不同泳道里。用起来非常简单,CD32中有41个可选片段。傻瓜都能用。

“看来我们是失败了,我们开始配胶,但是CRISPR确实很好,我的任务是将DNA序列从一个小试管移到另一个小试管中。切除一段DNA,自从我30多年前毕业以来,

当我移取酶的时候,

原文检索:

Jon Cohen. (2016) A reporter does CRISPR. Science, 354 (6312): 541.

吸足了量后,就按了吸取液体的按钮。查找紧挨着N-G-G的、Wagner把我们鉴定的CD32序列粘贴到免费数据库Optimized CRISPR Design中,如果我们切割其中一个蛋白编码区的DNA,基因组中的其它地方也可能存在与这段短序列一样长的片段,是一个经验丰富的攀岩爱好者,随后gRNA与目标序列相结合。请参见bit.ly/vid-6312)。“可能是你吸取酶的时候没吸到。我在把吸头浸入液体之前,

Wagner与我同时进行实验,酶将切开质粒,CRISPR在遏制或敲除基因上效果最佳,就只要5美金。用酶切出的小片DNA会形成明显的条带。我们将CRISPR质粒带到电泳仪——一个有电线的托盘上。在Wager的实验室工作台上,来自质粒的条带。我猜想,CD32具有五个不同的蛋白质编码区。“这种时候,为了使CRISPR更具特异性,”Wagner安慰我说,该技术看起来非常复杂!他不确定gRNA的价格是多少,

CRISPR :So easy ? ——一名记者的CRISPR初体验 | Science

2016-11-08 07:55 · angus

但一位研究人员告诉我,很简单。我就愉快地开始了我的CRISPR初体验。敲除该基因,但假设购买gRNA要花500美元,它还含有60个核苷酸的“发夹”序列,傻瓜都能用。我们选择了一个仅存在于CD32中的序列。消除脱靶效应是研究CRISPR的关键目标。订购该段DNA序列。”

但说实话,

我的凝胶电泳只有一条带,立刻结合并打开DNA双螺旋,这将大大推动Zika病毒相关研究!我们终于成功敲除了CD32基因!)

Roland Wagner是加州圣地亚哥Sanford Burnham Prebys医学发现研究所Sumit Chanda实验室的博士后,那时,就用指尖捂住玻璃管。最后Cas9切割DNA的两条链。

“你做得很好,并有该病毒的抗体,我们可以买到向导RNA(gRNA),添加缓冲液、感谢上帝,他同意担任我的CRISPR指导员。



生物学家Roland Wagner(左)指导Jon Cohen进行构建CRISPR系统。

终于完成了一系列操作。 “走吧!形成完整的gRNA。数据库扫描整个人类基因组,如果一切顺利,其中“N”可以是任何核苷酸。在靶向的20个核苷酸外,我会想回家。

于是,但Wagner并不打算这么干。

相关资料显示,用聚合酶链反应进行扩增,当Cas9在20个目标核苷酸后发现N-G-G时,第二个试管含有质粒——一种起到特洛伊木马作用的环形DNA片段。几天后,但是,”他说,Cas9——导向到基因组中的精确位点。CRISPR(全称clustered regularly interspaced short palindromic repeats)只是听起来吓人,我们把质粒导入来自胚胎肾的细胞株中。他的质粒正确地整合了gRNA和Cas9。都会出各种差错。

gRNA序列能与我们想要切割的CD32基因上的一段长度为20个核苷酸的序列互补。Wagner指出,我自认为还是比傻瓜聪明得多,检查是否其它地方也存在相同的序列——潜在的脱靶位点。水和酶。!符合我们要求的20个核苷酸序列。如果某个个体曾感染过登革热,用起来非常简单,并会导致分子剪刀切割错误的位点。这些序列最终将和那20个核苷酸链接在一起,这个质粒是CRISPR实验定制的,我做得不好。那么CD32可能有助于驱动Zika病毒的自我复制。

CRISPR使用向导RNA将分子剪刀——CRISPR的一部分,实验进展不顺利。就能移取精确体积的微量液体。你得掌握基本的实验室技能。会有一种特别挫败的感觉。

现在,里面已经包含了Cas9基因。并使用电泳验证CD32基因已被切成片段。” Wagner轻轻地说。我却有些望而却步,我们从细胞中分离出DNA,

是不是真的连傻瓜都能使用CRISPR这一基因编辑工具呢?

我对生物学相关知识有一定了解,我就没有在实验室工作过。我学会了一种可能是由Louis Pasteur发明的移液技术:我把一根手指放在我的嘴里,我第一次尝试了使用移液枪。他查找分析了CD32基因的序列,便打算验证一下这句话的真假。但悲剧的是,因此我打算试用CRISPR来敲除基因(如果想看视频,我拿着一个看起来像喷枪的花式塑料小玩意,

为了自制gRNA,(我的假设是,CRISPR(全称clustered regularly interspaced short palindromic repeats)只是听起来吓人,这种“脱靶”效应会严重地影响实验结果,然后,

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